【产品应用】二甲基亚砜是一种用于化学反应(如聚合酶链式反应 (PCR))的极性非质子溶剂,也可作为冷冻保护玻璃化剂用于保存细胞、组织和器官。DMSO 可在细胞冷冻培养基中用于保护细胞免受冰晶导致的机械损伤。它可用于原代、继代培养和重组的异倍体和杂交瘤细胞系、胚胎干细胞 (ESC) 以及造血干细胞的冻存。DMSO 常与 BSA 或胎牛血清 (FBS) 一同使用。
【注意】在室温下容易过冷并缓慢重融。 固化产品可以通过加热至室温来重新液化,而不会损害产品。用的时候要避免其挥发,因此需要准备1%-5%的氨水备用。若皮肤不慎沾上后,可用大量的清水及稀氨水冲洗。
【冻存程序】
以下程序适用于大多数细胞,如果必要,可以适当调整。冻存培养基的配方请参考其细胞说明书。
1.冻存前先检测细胞是否受到细菌、真菌、支原体和病毒的污染。通常冻存后10-14天才能得到污染检测结果,如果确定有污染,应将该细胞销毁。
2.冻存培养基由wan全培养基和5% DMSO(sigma D2650)组成。由于DMSO的溶解会放热,所以不能向细胞悬液中直接加入未稀释的DMSO。
3.以温和速度(125g×10 min)离心收集细胞,并以1×10*6-5×10*6活细胞/ml的密度重悬细胞。继续培养细胞直到复苏后细胞活性得以确定。
4.在冻存管上标记好细胞名称,编号和冻存日期等信息。然后每管加入1-1.8 ml细胞悬液(视冻存管体积)并密封。
5.室温条件下,将细胞在冻存培养基中平衡15-40 min(勿超)。这段时间中,可以将细胞悬液等分加入冻存管中。40min后,细胞活性可能会受到DMSO的影响而下降。
6.将冻存管置于已预冷至4℃的程序降温盒,并将降温盒置于-70℃(或更冷)的冰箱中至少24小时。或者,使用已预冷至4℃的可编程电子降温系统以1℃/min的速度将冻存管降温至-40℃以下,然后迅速降至-130℃。
7.将冻存管迅速转移至液氮罐或者-130℃冰箱。通常,冷冻的细胞会以10℃/min的速度升温,一旦达到-50℃以上,细胞会剧烈受损。
8.记录冻存位置和过程细节等信息。
DMSO二甲基亚砜http://www.bio100bio.com/Products-37955312.html
https://www.chem17.com/st596393/erlist_2472711.html
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